Darlene Glória, de origem familiar pacata e religiosa do interior do Espírito Santo, trabalhou em programas de calouros e radionovelas, passando a morar no Rio de Janeiro no auge da sua carreira de atriz.
Como cantora de rádio, deu início a sua trajetória em 1950.
Ao fixar residência no Rio de Janeiro, além de trabalhar como cantora, tornou-se vedete.
Em seu currículo também constam sua candidatura a miss Cachoeiro do Itapemirim e sua atuação no circo.
No cinema, o primeiro filme em que atuou foi Um Ramo para Luiza, em 1965.
Já na televisão, sua estreia foi na novela Véu de Noiva em 1969, seguida de O Bofe, ambas da TV Globo. Em sua passagem pela extinta TV Manchete, atuou em Carmem.
Em Toda Nudez Será Castigada, filme de Arnaldo Jabor vencedor de dois Kikitos, Darlene Glória foi ovacionada pelo público e pela crítica especializada no papel da prostituta Geni, conquistando o prêmio Coruja de Ouro.
Além dessa conquista, recebeu indicação como melhor atriz e melhor atriz coadjuvante no filme Feliz Natal. Vale destacar que Darlene também participou do teatro de revista.
Mas foi em Os homens que eu tive, lançado em 1973 e dirigido por Teresa Trautman, que deu vida a protagonista Pity, atuando ao lado de Milton Moraes e Arduíno Colassanti. Considerado o primeiro longa-metragem ficcional dirigido por uma mulher, o filme é tido como subversivo ao abordar pautas feministas como a independência e sexualidade feminina, sendo censurado durante a ditadura militar e liberado apenas em 1980 com o título Os Homens e Eu.
Acometida pela depressão no fim da década de 70, abandonou a carreira artística e surpreendentemente converteu-se em pastora evangélica, lançando o livro Uma nova Glória, onde relata diversas experiências vividas até o momento da sua conversão.
Ao final dessa lacuna na sua carreira, Darlene retornou à TV na pele de Aurora no remake de Pecado Capital e ao cinema nos anos 2000.
Atuou em Anjos do Sol em 2006 e Feliz Natal, de Selton Mello, em 2008.
Com seu retorno de Nova York, onde produziu filmes e vídeos evangélicos, voltou a atuar na Rede Globo em episódios do Você Decide e A Diarista.
Mais recentemente, participou de O Beiço de Estrada em 2018.
